تجربة لأداء تلطيخ الأساسية من البكتيريا لمراقبة شكلها وحجمها وترتيبها

تهدف إلى تنفيذ تلطيخ الأساسية البسيطة للبكتيريا ، لمراقبة شكله وحجمه وترتيبه.

غرض:

لا يمكن ملاحظة الشكل الطبيعي وحجم وترتيب البكتيريا بواسطة تلطيخ أساسي ، حيث أن هذه الخصائص مشوهة بالتثبيت الحراري.

الى جانب ذلك ، بعض البكتيريا (مثل spirilli) من الصعب أن تكون ملطخة.

وبالتالي ، يتم تنفيذ تلطيخ سلبي لسببين على النحو التالي:

(ا) لمراقبة الشكل الطبيعي وحجم وترتيب البكتيريا ، حيث لا يتم تثبيت الحرارة هنا.

(ب) لمراقبة تلك البكتيريا التي يصعب صبغها؟

المبدأ:

وتحمل خلايا البكتيريا شحنة سالبة على سطحها ، وتحيط بها الكاتيونات ، مثل Na ⁺ و K ⁺ (الشكل 5.9). في التلطخ الحمضي ، يتم استخدام وصمة حمضية ، والتي تتأين في كروموجين أنيوني (أيون صبغ مشحون سلبًا) وكاتيون.

تتم إزالة الكرومونات المشحونة بالسلب عن طريق الشحنات السالبة للسطح على خلايا البكتيريا ، والتي لا يمكن للصبغة أن تخترقها. الآن ، يمكن تمييز الخلايا غير الملوّنة بسهولة ضد الخلفية الملونة.

المواد المطلوبة:

الشرائح ، حلقة ، وصمة حمضية (eosin / nigrosin) ، ثقافة مرق / لوحة / مائلة من البكتيريا ، والمجهر ، وزيت الغمر.

إجراء:

1. يتم تنظيف الشريحة بشكل صحيح تحت ماء الصنبور ، بحيث لا تبقى المياه كقطرات على سطحها (شكل 5.10).

2. تمسح المياه الملتصقة بها مع ورقة ماص وشريحة الهواء المجفف.

3. يتم وضع قطرة صغيرة من البقعة الحمضية (nigrosin / eosin) بالقرب من أحد طرفي الشريحة.

4. يتم تعقيم حلقة على اللهب وتبرد. من الناحية النظرية ، يتم نقل حلقة من البكتيريا من صفيحة أجار أو مائل أو حلقة من البكتريا المعلقة من مرق السائل إلى قطرة البقع. يتم إجراء تعليق للبكتيريا في البقعة عن طريق خلط حلقة البكتيريا برفق في نقطة اللطخة ، وبطريقة لا ينتشر فيها القطرة.

5. تنظّم شريحة نظيفة أخرى بزاوية 30 درجة إلى الشريحة الأولى ، بطريقة بحيث تلامس إحدى الحواف الضيقة السابقة السطح الأخير نحو النهاية دون هبوط البقعة.

6. في هذا الوضع المائل ، يتم سحب الشريحة الثانية نحو إسقاط البقع ، إلى أن تلمس الحافة القطرة وينتشر القطرة على طول الحافة.

7. في هذا الوضع المائل ، يتم دفع الشريحة الثانية إلى الوراء لتشكيل لطخة رقيقة من البكتيريا.

8. لطاخة الهواء المجفف. التثبيت الحراري لا يتم هنا.

9. يتم قص الشريحة إلى مرحلة المجهر والمسحة لوحظ تحت أهداف منخفضة الطاقة وجافة عالية.

10. يتم وضع قطرة من زيت الغمر على اللطاخة.

11. لوحظ اللطاخة تحت الهدف الغمر بالنفط.