في اختبار اللايدية لمعرفة قدرة البكتيريا على تحلل الأحماض الأمينية تريبتوفان (مع الشكل)

في اختبار المعول لاكتشاف قدرة البكتيريا لتحليل الأحماض الأمينية Tryptophan!

المبدأ:

بعض البكتيريا لديها القدرة على تحلل الحامض الأميني تريبتوفان لإفرازه ، لأنها يمكن أن تنتج إنزيم 'تريبتوفاناز'.

يتم تحلل التريبتوفان مع إنتاج الإندول وحمض البيروفيك والأمونيا. يتم الكشف عن الإندول عن طريق كاشف اللون ، باراديميثيلامينيوبنزالديهيد (p-DMAB ، أي كاشف Kovac) ، الذي ينتج حلقة وردية اللون. يتفاعل الإنبول مع p-DMAB لإنتاج المركب البنفسجي الأحمر quinoidal (صبغة rosindole) ، وهو لون وردي. يتم إنتاج الحلقة على السطح ، حيث يتم إعداد الكاشف في كحول الأميل.

في اختبار الإندول ، تزرع بكتيريا الاختبار في وسط مرق يحتوي على تريبتوفان. إذا كانت البكتريا لديها القدرة على تحلل التريبتوفان لتتحرك ، يتم تشكيل حلقة وردية على سطح ثقافة المرق عند إضافة p-DMAB.

المواد المطلوبة:

أنابيب الاختبار ، القارورة المخروطية ، المقابس القطنية ، حلقة التطعيم ، الأوتوكلاف ، الموقد ، غرفة تدفق الصفائح ، التخلص من الجرة ، الحاضنة ، مرق التريبتوني ، كاشف Kovac (paradimethylaminobenzaldehyde) ، المستعمرات المعزولة أو الثقافات البحتة من البكتيريا.

إجراء:

1. يتم وزن مكونات محلول مرق التريبتوني أو مسحوقه الجاهز المطلوب 100 مل من المرق في 100 مل من الماء المقطر في دورق مخروطي سعة 250 مل عن طريق الاهتزاز والدوران. تريبتون بمثابة مصدر تريبتوفان. ولذلك ، فإن إضافة التريبتوفان إلى المرق أمر اختياري (الشكل 7.3).

2. يتم تحديد درجة الحموضة باستخدام ورقة الرقم الهيدروجيني أو مقياس الرقم الهيدروجيني وتعديلها إلى 7.5 باستخدام 0.1N HC1 إذا كان أكثر أو استخدام 0.1N هيدروكسيد الصوديوم إذا كان أقل. يتم تسخين القارورة ، إذا لزم الأمر ، لإذابة المكونات تمامًا.

3. يتم توزيع المرق في خمسة أنابيب اختبار (حوالي 5 مل لكل منهما) ، موصولة بالقطن ، مغطاة بورق حرفة ومربوطة بخيوط أو شريط مطاطي.

4. يتم تعقيم أنابيب المرق عند 121 درجة مئوية (ضغط 15 رطل / بوصة مربعة) لمدة 15 دقيقة في الأوتوكلاف.

5. يسمح لأنابيب المرق أن تبرد إلى درجة حرارة الغرفة.

6. يتم تحصين البكتيريا المعقمه بشكل معقم ، ويفضل في حجرة تدفق الصفحي ، في المرق مع مساعدة من حلقة التطعيم المعقمة على لهب bunsen. يتم تعقيم الحلقة بعد كل عملية تلقيح.

7. تحضن أنابيب المرق المحضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة في الحاضنة.

8. يتم إسقاط كاشف اللون ، بارا dimethylaminobenzaldehyde (p-DMAB) ، (أي كاشف Kovac) في أنابيب مرق (0.5 مل لكل وحدة) ويلاحظ بعد دقيقة واحدة.

بدلا من ذلك:

7. توضع شرائط الورق المنقوعة في حمض الأكساليك في فم أنابيب المرق المحصنة ، بحيث يبقى حوالي نصف شرائط الورق داخل الأنابيب دون لمس المرق والنصف الآخر يظل بالخارج. لهذا ، يتم قطع ورق الترشيح إلى شرائح طولها 35 مم وعرضها 5 مم تقريبًا. تنقع الشرائط في محلول مائي ساخن مشبع من حمض الأكساليك وتجفف قبل الاستخدام.

8. حاضنة أنابيب مرق المحضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة في حاضنة.