كيفية تنفيذ تلطيخ كبسولة من البكتيريا

تهدف إلى أداء تلطيخ كبسولة من البكتيريا ، لمراقبة كبسولة البكتيرية.

غرض:

في بعض البكتيريا ، يحيط جدار الخلية بظرف خلية لزجة تسمى "كبسولة". وهي مصنوعة من عديد السكاريد أو بروتين سكري أو عديد ببتيد.

عندما تكون الكبسولة رفيعة جدًا بحيث لا يمكن ملاحظتها تحت المجهر الضوئي ، فإنها تسمى "microcapsule" وعندما تكون سميكة جدًا بحيث يتم تضمين العديد من الخلايا في مصفوفة المحفظة ؛ يطلق عليه "الوحل".

على أساس وجود أو عدم وجود كبسولة ، البكتيريا هي من نوعين على النحو التالي:

(1) البكتيريا المحببة:

البكتيريا ، التي تمتلك كبسولة هي بكتيريا محجوزة.

(2) البكتيريا غير المحفوظة:

البكتيريا ، التي لا تمتلك كبسولة هي بكتيريا غير محفوفة

الغرض من تلطيخ الكبسولة هو مراقبة كبسولة بكتيرية عن طريق تمييز المواد الحافظة من خلية البكتيريا.

المبدأ:

في تلطيخ الكبسولة ، يتم إجراء تشويه البكتيريا في مركز الشريحة. وهي ليست مثبتة بالحرارة ، لأن انكماش الخلايا الناجم عن التسخين قد يخلق منطقة واضحة حول الخلية ، والتي قد تكون خاطئة على أنها كبسولة.

علاوة على ذلك ، بما أن المادة المحببة قابلة للذوبان في الماء ويمكن غسلها بغسل قوي ، فإن اثنين فقط من الكواشف يستخدمان في التلوين بدون أي غسيل مائي. واحد من اثنين من الكواشف هو البقعة الأولية ، والبنفسجي الكريستال. فإنه يضفي اللون الأرجواني الأزرق الغامق على كل من الخلية وكذلك الكبسولة.

ومع ذلك ، يتم "امتصاصه" في الخلية بسبب الطبيعة الأيونية للمكونات الخلوية ، في حين أنه ببساطة "يلتصق" بالكبسولة ، بسبب الطبيعة غير الأيونية لمواد المحفظة. لمنع طرد مواد المحفظة ، فإن اللطخة لا تغسل بالماء.

الكاشف الثاني ، كبريتات النحاس يعمل على حد سواء كعامل إزالة اللون وصورة مضادة. يزيل اللون عن طريق إزالة البنفسجية البلورية الزائدة من جميع أنحاء الخلايا وكذلك البنفسجي الكريستال الالتزام الكبسولة. كما أنه يقاوم الكبسولة ويضفي عليها لون أزرق فاتح. تظهر الآن الكبسولة باللون الأزرق الفاتح ، في حين تظهر الخلية باللون الأرجواني والأرجواني العميق.

المواد المطلوبة:

الشريحة ، حلقة ، زيت الغمر ، المجهر ، والبقع البنفسجي الكريستال ، حل كبريتات النحاس (20 ٪).

إجراء:

1. يتم تنظيف الشريحة بشكل صحيح تحت ماء الصنبور ، بحيث لا يبقى الماء كقطرات على سطحه (الشكل 5.14).

2. تمسح المياه الملتصقة بها مع ورقة ماص وشريحة الهواء المجفف.

3. يتم تحضير لطخة البكتيريا في مركز الشريحة في طريقتين على النحو التالي.

(ا) إذا لوحظت البكتيريا التي تزرع في صفيحة أجار أو مائلة أجار ، يتم وضع قطرة ماء في مركز الشريحة ويتم نقل حلقة من البكتيريا من الصفيحة أو الميل إليها بواسطة حلقة معقمة على لهب. ثم ، عن طريق الدوران البطيء للحلقة في الهبوط ، يتم إجراء تعليق البكتيريا وينتشر حتى يتم الحصول على اللطاخة.

(ب) إذا لوحظت البكتيريا التي تنمو في مرق السائل ، يتم وضع قطرة من تعليق البكتيريا مباشرة في مركز الشريحة عن طريق حلقة تعقيم اللهب ويتم لطخة تنتشر.

4. لطاخة الهواء المجفف. لا يتم تثبيت الحرارة لأن انكماش الخلية الناتج قد يخلق منطقة واضحة حول البكتيريا ، والتي قد تكون خاطئة ككبسولة.

5. غمرت اللطخة مع البقعة الأولية ، والبنفسجي الكريستال ، لمدة 5-7 دقائق.

6. يتم غسل اللطاخة بمحلول كبريتات النحاس بنسبة 20٪. لمنع طرد مواد المحفظة ، فإن اللطخة لا تغسل بالماء.

7. الشريحة هي جافة مع ورقة ماص.

8. يتم قص الشريحة إلى مرحلة الميكروسكوب والمسحة التي لوحظت تحت قوة منخفضة وأهداف جافة عالية.

9. يتم وضع قطرة من زيت الغمر على اللطاخة.

10. لوحظ اللطاخة تحت الهدف الغمر بالنفط.