تجربة Voges-Proskauer على البكتيريا لإيجاد قدرتها على استخدام الجلوكوز (مع الشكل)

قراءة هذه المقالة لمعرفة المزيد عن اختبار Voges-Proskauer (اختبار VP) على البكتيريا لمعرفة قدرتها على الاستفادة من الجلوكوز مع إنتاج acetylmethylcarbinol!

المبدأ:

بعض البكتيريا لديها القدرة على الاستفادة من الجلوكوز وتحويله إلى acetylmethylcarbinol (الأسيتون) ، وهو منتج نهائي محايد.

هذه البكتيريا في البداية استقلاب الجلوكوز إلى حمض البيروفيك ، والذي يتم استقلابه من خلال حمض الأسيتيك المتوسط ​​الأيضي إلى acetylmethylcarbinol (الأسيتون) و C02 عبر "مسار غليكول البيوتيلين".

يتأكسد Acetylmethylcarbinol إلى ثنائي الأسيتيل في وجود naphthol تحت حالة القلوية (40 في المائة KOH). يتفاعل ثنائييسيتيل مع مجموعة جوانيدين من الكرياتين (من الببتون المستخدم في وسط المزرعة) لإنتاج لون وردي.

في اختبار Voges-Proskauer (اختبار VP) ، تزرع بكتيريا الاختبار في وسط مرق يحتوي على الجلوكوز. إذا كانت للبكتيريا القدرة على استخدام الجلوكوز مع إنتاج الأسيتيل ميثيل كاربنول (الأسيتون) كمنتج نهائي محايد ، يكتسب المرق لون وردي وردي عند إضافة محلول naphthol متبوعًا بـ KOH 40٪.

المواد المطلوبة:

أنابيب الاختبار ، القارورة المخروطية ، المقابس القطنية ، حلقة التلقيح ، الأوتوكلاف ، الموقد ، حجرة التدفق الصفحي ، الجرة ، الحاضنة ، حساء MR-VP (أو مرق الفوسفات الجلوكوز) ، VP solution I (حل كاشف Barritt A) و VP solution II (حل كاشف باريت B) ، مستعمرات معزولة أو ثقافات نقية من البكتيريا.

إجراء:

1. يوزن ويذوب في مكونات 100 مل من الماء المقطر في قارورة مخروطية سعة 250 مل عن طريق الاهتزاز والمكونات لمركب MR-VP broth medium (المحتوية على الجلوكوز كالمكون الرئيسي) أو مسحوقه الجاهز المطلوب لـ 100 مل من المرق. يحوم (الشكل 7.5). كما يمكن استخدام المرق المستخدم في اختبار أحمر الميثيل هنا. عادة يتم استخدام نفس المرق للاختبارات (MR و VP) في نفس الوقت.

2. يتم تحديد درجة الحموضة باستخدام ورقة الرقم الهيدروجيني أو الرقم الهيدروجيني وتعديلها إلى 6.9 باستخدام 0.1N HCI إذا كان أكثر أو استخدام 0.1N هيدروكسيد الصوديوم إذا كان أقل. يتم تسخين القارورة ، إذا لزم الأمر ، لإذابة المكونات تمامًا.

3. يتم توزيع المرق في خمسة أنابيب اختبار (حوالي 10 مل لكل منها) ، موصولة بالقطن ، مغطاة بورق حرفة ومربوطة بخيوط أو شريط مطاطي.

4. يتم تعقيم أنابيب المرق عند 121 درجة مئوية (ضغط 15 رطل / بوصة مربعة) لمدة 15 دقيقة في الأوتوكلاف.

5. يسمح لأنابيب المرق أن تبرد إلى درجة حرارة الغرفة.

6. يتم تحصين البكتيريا المعقمه بشكل معقم ، ويفضل في حجرة تدفق الصفحي ، في المرق مع مساعدة من حلقة التطعيم المعقمة على لهب bunsen. يتم تعقيم الحلقة بعد كل عملية تلقيح.

7. يتم تحضين أنابيب مرق المحضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 48 إلى 72 ساعة في الحاضنة.

8. يتم إسقاط محلول VP الأول (المحتوي على α-naphthol) في أنابيب المرق (0.2 ملل) ويخلط بشكل كامل.

9. يتم إسقاط محلول VP II (المحتوي على KOH) في أنابيب المرق (0.6 مل لكل منهما) ، ويخلط بشكل كامل ويسمح بالوقوف لمدة 30 دقيقة إلى ساعتين.

الملاحظات:

1. اللون الوردي روز المنتجة: VP إيجابية.

2. لون وردي لم ينتج: VP سلبي.