اختبار Urease على البكتيريا لمعرفة قدرتها على تحلل اليوريا (مع الشكل)

اختبار Urease على البكتيريا لمعرفة قدرتها على تحلل اليوريا (مع الشكل)!

المبدأ:

بعض البكتيريا لديها القدرة على تحلل (تحلل في وجود الماء) اليوريا إلى NH ₃ و CO ₂ ، لأنها يمكن أن تنتج إنزيم "urease".

NH ₃ هو قلوي (أساسي) ، ويرجع ذلك إلى أنه يزيد من الرقم الهيدروجيني تغيير لون الفينول الأحمر من الأصفر إلى الوردي.

في اختبار اليورياز ، تزرع بكتيريا الاختبار على مبيدات الآغار التي تحتوي على اليوريا والفينول الأحمر. إذا كانت البكتيريا لديها القدرة على تحلل اليوريا ، يتغير لون الوسط من الأصفر إلى الوردي. قد تنتج بعض البكتيريا NH ₃ عن طريق تحطيم peptones في الوسط. في مثل هذه الحالات يتم الحصول على نتيجة إيجابية كاذبة.

المواد المطلوبة:

أنابيب الاختبار ، قارورة مخروطية ، مقابس القطن ، إبرة التلقيح ، الأوتوكلاف ، الموقد بنسن ، غرفة تدفق الصفحي ، التخلص من جرة ، حاضنة ، جهاز ترشيح الغشاء ، أجار اليوريا ، مستعمرات معزولة أو ثقافات نقية من البكتيريا.

إجراء:

1. خمسة أنابيب اختبار موصولة بالقطن ومغطاة بورق حرفي ومربوطة بخيط أو شريط مطاطي (الشكل 7-15).

2. يوزن ويحلل في 90 مل من الماء المقطر في قارورة مخروطية سعة 250 مل بواسطة مكونات أجار اليوريا اليوريا (التي تحتوي على اليوريا كمكون رئيسي) أو مسحوق جاهز (باستثناء اليوريا). يهز ويحوم.

3. يتم تحديد درجة الحموضة باستخدام ورقة الرقم الهيدروجيني أو الرقم الهيدروجيني وتعديلها إلى 6.9 باستخدام 0.1N HCI إذا كان أكثر أو استخدام 0.1N هيدروكسيد الصوديوم إذا كان أقل.

4. يتم تسخين القارورة لإذابة الأجار في الوسط بشكل كامل.

5. إن القارورة موصولة بالقطن ، مغطاة بورق حرفي ومربوطة بخيط أو شريط مطاطي.

6. أنابيب الاختبار الخمسة والقارورة المخروطية التي تحتوي على أجار اليوريا (باستثناء اليوريا) يتم تعقيمها عند 121 درجة مئوية (ضغط 15 رطل / بوصة مربعة) لمدة 15 دقيقة في الأوتوكلاف.

7. بعد التعقيم ، يتم إزالتها من الأوتوكلاف ويسمح لها بالتبريد لبعض الوقت دون السماح للوسط بالتصلب. التبريد للوسط يمنع التكثيف وتراكم قطرات الماء على الميلان. إذا كان الوسيط قد تم تحضيره وتوطيده بالفعل أثناء التخزين ، فيجب تسليته عن طريق التسخين بعناية حتى يذوب تماما.

8. يتم تحضير 20٪ من محلول اليوريا عن طريق إذابة 20 جرام من اليوريا في 100 مل من الماء المقطر وتعقيمها بواسطة جهاز ترشيح غشائي ، لأن اليوريا لا يمكن تعقيمها بالحرارة ، لأنها تتحلل عند التسخين.

9. 10 مل من محلول اليوريا المعقم يتم خلطه بشكل معقم مع 90 مل من الوسط المسال المعقم المبرد (المسال بالتسخين).

10. قبل أن تتوطد ، يتم توزيع الوسيط ، في الحالة المنصهرة الدافئة ، معقمًا بشكل معقم في أنابيب الاختبار الخمسة المعزولة بالقطن (حوالي 20 مل لكل منها).

11. يتم الاحتفاظ بأنابيب الاختبار في وضع مائل لتبريد وترسيخ الوسط ، وذلك للحصول على أغوار اليوريا.

12. يتم تحصين جراثيم الاختبار بطريقة معقمّة ، ويفضل في غرفة تدفق الصفحي ، في الميلان عن طريق الطعن في المؤخرة والتسطير على سطح الميلان بمساعدة إبرة معقمة باللهب. يتم تعقيم الإبرة بعد كل عملية تلقيح.

13. يتم تحضين الحزونات الملقحة عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة في الحاضنة.