اختبار التحلل النشا على البكتيريا لاكتشاف قدرتها على التحلل من النشا

اختبار التحلل النشا على البكتيريا لاكتشاف قدرتها على التحلل من النشا!

المبدأ:

بعض البكتيريا لديها القدرة على تحلل النشا ، لأنها يمكن أن تنتج أنزيم saccharolytic.

في حين أن النشا يتألف من اللون الأزرق الداكن مع اليود ، لا تحصل منتجاته النهائية المتحللة بالماء على اللون الأزرق الداكن مع اليود.

في اختبار التحلل المائي للنشا ، تزرع بكتيريا الاختبار على ألواح أجار تحتوي على نشا. بعد رؤية مستعمرات البكتيريا ، تغمر الصفائح بمحلول اليود. إذا كانت للبكتيريا القدرة على تحلل النشا ، تحلل مستعمراتها النشاء في الوسط في المناطق المحيطة بها ، في حين تحتوي بقية مناطق الأطباق على نشا غير هيدرولي.

ونتيجة لذلك ، عندما يتم غمرها بمحلول اليود ، تتشكل مناطق شفافة واضحة حول المستعمرات ، حيث أن المنتجات المحلاة من حولها لا تشكل لون أزرق داكن مع اليود. من ناحية أخرى ، تصبح بقية مناطق الصفائح باللون الأزرق الغامق ، حيث يشكل اليود اللون الأزرق الداكن مع النشا غير المتحلل في هذه المناطق.

المواد المطلوبة:

أطباق بتري ، قارورة مخروطية ، مقابس القطن ، حلقة التلقيح ، الأوتوكلاف ، الموقد ، غرفة التدفق الصفحي ، التخلص من الجرة ، الحاضنة ، آجار النشا ، محلول اليود Lugol ، مستعمرات معزولة أو ثقافات نقية من البكتيريا.

إجراء:

1. يتم تنظيف اثنين من أطباق بتري ، مغطاة بورق حرفة وربطها مع الخيط أو الشريط المطاطي (الشكل 7.21). يتم حذف هذه الخطوة وكذلك تعقيم أطباق بتري في الخطوة 6 ، إذا تم استخدام أطباق بتري تعقيمها الفرن مباشرة.

2. يوزن ويحلل 100 مل من الماء المقطر في دورق مخروطي 250 مل عن طريق الاهتزاز والدوران.

3. يتم تحديد درجة الحموضة باستخدام ورقة الرقم الهيدروجيني أو الرقم الهيدروجيني وتعديلها إلى 7.2 باستخدام 0.1N HCI إذا كان أكثر أو استخدام 0.1N هيدروكسيد الصوديوم إذا كان أقل.

4. يتم تسخين القارورة لإذابة الأجار في الوسط بشكل كامل.

5. إن القارورة موصولة بالقطن ، مغطاة بورق حرفي ومربوطة بخيط أو شريط مطاطي.

6. يتم تعقيم اثنين من أطباق بتري والقارورة المخروطية التي تحتوي على وسط أجار النشا عند 121 درجة مئوية (ضغط 15 رطل / بوصة مربعة) لمدة 15 دقيقة في الأوتوكلاف.

7. بعد التعقيم ، يتم إزالتها من الأوتوكلاف ويسمح لها بالبرودة لبعض الوقت ، دون السماح للوسط بالتصلب. التبريد للوسط يمنع التكثيف وتراكم قطرات الماء داخل الصفائح. إذا كان الوسيط قد تم تحضيره وتوطيده بالفعل أثناء التخزين ، فيجب تسليته عن طريق التسخين بعناية حتى يذوب تماما.

8. لتحضير أطباق أجار النشاء ، قبل أن يبرد وسط أجار النشاء المعقم ويصلب ، في حالة منصهرة دافئة ، يتم سكبها بشكل معقم ، ويفضل داخل غرفة التدفق الصفحي ، إلى طبقتي بتري معقمة (حوالي 20 مل لكل منهما) ، بحيث الوسط المنصهر يغطي الجزء السفلي من أطباق بتري تماما.

ثم يتم تغطية الصفائح بواسطة أغطيةها ويسمح لها بالبرودة ، وذلك لترسيخ الوسيط فيها. يتم تبخير بخار الماء الذي قد يتكثف على السطح الداخلي للأطباق والأغطية عن طريق الحفاظ على الصفائح والأغطية في وضع مقلوب في الحاضنة عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة تقريبًا.

9. يتم وضع علامة على كل لوحة على الجانب السفلي في أربعة أرباع.

10. "التلقيح الفوري" لبكتريا الاختبار يتم بشكل معقم ، ويفضل داخل غرفة التدفق الصفحي ، في وسط كل ربع عن طريق عمل بقعة (أو لطخة صغيرة) للبكتيريا بمساعدة حلقة معقمة على اللهب. يتم تعقيم الحلقة بعد كل عملية تلقيح.

11. يتم تحضين الألواح الملقحة في وضع مقلوب ، من الأعلى إلى الأسفل ، عند 37 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة في الحاضنة حتى تظهر مستعمرات البكتيريا.

12. تغمر اللوحات بمحلول اليود من Lugol.