اختبار Oxidase على البكتيريا لمعرفة قدرتها على تحلل الجيلاتين عن طريق إنتاج الجيلاتيناز

اختبار Oxidase على البكتيريا لمعرفة قدرتها على تحلل الجيلاتين عن طريق إنتاج الجيلاتيناز!

المبدأ:

بعض البكتيريا لديها القدرة على تحلل الجيلاتين ، لأنها يمكن أن تنتج إنزيم الجيلاتين "البروتيني".

وفي حين أن الجيلاتين يتأجج بسبب الشفافية في إنتاج الكلوريد الزئبقي ، فإن منتجاته النهائية المتحللة بالماء لا يتحصل عليها كلوريد الزئبق ، الذي لا ينتج عنه مثل هذه الشفافية ، بل ينتج الشفافية.

في اختبار جيلاتينية ، تزرع البكتيريا اختبار على لوحات أجار تحتوي على الجيلاتين. بعد رؤية مستعمرات البكتيريا ، تغمر الصفائح بحل من كلوريد الزئبق. إذا كانت للبكتيريا القدرة على تحلل الجيلاتين ، تحلل مستعمراتها الجيلاتين في الوسط في المناطق المحيطة بها ، في حين أن بقية المناطق في الألواح تحتفظ بالجيلاتين غير المتحلل.

ونتيجة لذلك ، عندما يتم غمرها بمحلول كلوريد الزئبق ، تتشكل مناطق شفافة شفافة حول المستعمرات ، حيث أن المنتجات المحورة من حولها لا تشكل رواسب مع كلوريد الزئبق. من ناحية أخرى ، تصبح بقية مناطق الصفائح شفافة ، حيث أن الجيلاتين غير المتحلل في هذه المناطق يتأرجح مع كلوريد الزئبق.

المواد المطلوبة:

أطباق بيتري ، قارورة مخروطية ، مقابس القطن ، حلقة التلقيح ، الأوتوكلاف ، الموقد ، غرفة التدفق الصفحي ، الجرة ، الحاضنة ، أجار الجيلاتين في فريزر ، محلول كلوريد الزئبق ، المستعمرات المعزولة أو الثقافات البكتيرية النقية.

إجراء:

1. يتم تنظيف اثنين من أطباق بتري ، مغطاة بورق حرفة وربطها مع الخيط أو الشريط المطاطي (الشكل 7.20). يتم حذف هذه الخطوة وكذلك تعقيم أطباق بتري في الخطوة 6 ، إذا تم استخدام أطباق بتري تعقيمها الفرن مباشرة

2. يتم وزن مكونات محلول أجار الجيلاتين في Fraizer (المحتوي على الجيلاتين كمكون رئيسي) أو مسحوقه الجاهز المطلوب لـ 100 مل من الوسط ويذوب في 100 مل من الماء المقطر في دورق مخروطي سعة 250 مل بالاهتزاز والدوران .

3. يتم تحديد درجة الحموضة باستخدام ورقة الرقم الهيدروجيني أو الرقم الهيدروجيني وتعديلها إلى 7.2 باستخدام 0.1N HCI إذا كان أكثر أو استخدام 0.1N هيدروكسيد الصوديوم إذا كان أقل.

4. يتم تسخين القارورة لإذابة الأجار في الوسط بشكل كامل.

5. إن القارورة موصولة بالقطن ، مغطاة بورق حرفي ومربوطة بخيط أو شريط مطاطي.

6. يتم تعقيم اثنين من أطباق بتري والقارورة المخروطية التي تحتوي على متوسط ​​أجار الجيلاتين في فريزر عند 121 درجة مئوية (ضغط 15 رطل / بوصة مربعة) لمدة 15 دقيقة في الأوتوكلاف.

7. بعد التعقيم ، يتم إزالتها من الأوتوكلاف ويسمح لها بالتبريد لبعض الوقت دون السماح للوسط بالتصلب. التبريد للوسط يمنع التكثيف وتراكم قطرات الماء داخل الصفائح. إذا كان الوسيط قد تم تحضيره وتوطيده بالفعل أثناء التخزين ، فيجب تسليته عن طريق التسخين بعناية حتى يذوب تماما.

8. لتحضير أطباق أجار الجيلاتين ، قبل أن يبرد وسط أجار الجيلاتين المعقم في Frazier ويصلب ، في حالة منصهرة دافئة ، يتم سكبها بشكل مطهر ، ويفضل داخل غرفة التدفق الصفحي ، إلى طبقتي بتري المعقمتين (حوالي 20 مل لكل منهما) ، لذلك أن الوسط المنصهر يغطي الجزء السفلي من أطباق بتري تمامًا.

ثم تغطى الألواح بأغطيةها ويسمح لها بالبرودة ، حتى تصلب الوسط فيها. يتم تبخير بخار الماء الذي قد يتكثف على السطح الداخلي للأطباق والأغطية عن طريق الحفاظ على وضع الأغطية والأغطية في وضع الحاضنة في درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة ساعة تقريبًا.

9. يتم وضع علامة على كل لوحة على الجانب السفلي في أربعة أرباع.

10. "التلقيح الفوري" لبكتريا الاختبار يتم بشكل معقم ، ويفضل داخل غرفة التدفق الصفحي ، في وسط كل ربع عن طريق عمل بقعة (أو لطخة صغيرة) للبكتيريا بمساعدة حلقة معقمة على اللهب. يتم تعقيم الحلقة بعد كل عملية تلقيح.

11. يتم تحضين الألواح الملقحة في وضع مقلوب ، من الأعلى إلى الأسفل ، عند 37 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة في الحاضنة حتى تظهر مستعمرات البكتيريا.

12 - تغمر الصفائح بحل من كلوريد الزئبق (HgCl ₂ ).

الملاحظات:

مناطق شفافة واضحة تشكلت حول مستعمرات البكتيريا: الجيلاتيناز إيجابية.

مناطق شفافة واضحة لا تتشكل حول مستعمرات البكتيريا: جيلاتيناز سلبي.