اختبار النترات للحد من البكتيريا لمعرفة القدرة على الحد من النترات

قراءة هذه المادة لمعرفة المزيد عن أداء اختبار الحد من النترات على البكتيريا لمعرفة قدرتها على الحد من النترات!

المبدأ:

بعض البكتيريا لديها القدرة على الحد من النترات ، لأنها يمكن أن تنتج إنزيم "اختزال النترات".

هذا الإنزيم ، في وجود متبرع إلكترون مناسب ، يقلل النترات (N0 3 - ) إلى النيتريت (N0 2 - ). يشار إلى وجود N0 2 - بواسطة حمض sulphanilic و naphthylamine ، والتي تغير اللون إلى اللون الأحمر.

في اختبار تخفيض النترات ، تزرع بكتيريا الاختبار في وسط مرق يحتوي على نترات (N0 3 - ). إذا كانت البكتريا لديها القدرة على الحد من النترات ، يكتسب المرق لونًا أحمرًا عند إضافة حمض السلفانيليك و naphthylamine.

إذا لم يتم إنتاج اللون الأحمر ، فإنه يشير إلى أن N0 3 - لا يتم تقليله من قبل البكتيريا على الإطلاق أو تنتج البكتيريا إنزيم اختزال النترات بقوة عالية ، مما يقلل بسرعة N0 3 - ما وراء N0 2 - إلى NH 3 و N 2 . لتأكيد ذلك ، يتم إضافة كمية صغيرة من غبار الزنك ، مما يقلل من NO 3 - ، إذا كان متاحًا في الوسط ، إلى N02 - ، وبالتالي إنتاج اللون الأحمر.

وهكذا ، إذا تم إنتاج اللون الأحمر ، فإنه يشير إلى أن N0 3 - موجود في الوسط دون تغيير والبكتيريا لا تملك القدرة على الحد من النترات. إذا لم يتم إنتاج اللون الأحمر ، فإنه يشير إلى أن N0 3 - تم تخفيضه إلى ما بعد N0 2 - إلى NH 3 و N 2 وأن البكتريا لديها القدرة على الحد من النترات.

المواد المطلوبة:

أنابيب الاختبار ، القارورة المخروطية ، المقابس القطنية ، حلقة التلقيح ، الأوتوكلاف ، الموقد ، غرفة تدفق الصفائح ، التخلص من الجرة ، الحاضنة ، مرق النترات ، غبار الزنك ، كاشف النترات الحل A ، كاشف نترات الحل B ، المستعمرات المعزولة أو الثقافات البحتة من البكتيريا.

إجراء:

1. يوزن ويحلل 100 مل من الماء المقطر في قارورة مخروطية سعة 250 مل عن طريق الاهتزاز والدوران (مكونات نترات المرق المتوسط ​​(المحتوية على النترات كمكون رئيسي) أو مسحوقه الجاهز المطلوب لـ 100 مل من المرق. الشكل 7.10).

2. يتم تحديد درجة الحموضة باستخدام ورقة الرقم الهيدروجيني أو الرقم الهيدروجيني وتعديلها إلى 7.2 باستخدام 0.1N HCI إذا كان أكثر أو استخدام 0.1N هيدروكسيد الصوديوم إذا كان أقل. يتم تسخين القارورة ، إذا لزم الأمر ، لإذابة المكونات تمامًا.

3. يتم توزيع المرق في خمسة أنابيب اختبار (حوالي 10 مل لكل منها) ، موصولة بالقطن ، مغطاة بورق حرفة ومربوطة بخيوط أو شريط مطاطي.

4. يتم تعقيم أنابيب المرق عند 121 درجة مئوية (ضغط 15 رطل / بوصة مربعة) لمدة 15 دقيقة في الأوتوكلاف.

5. يسمح لأنابيب المرق أن تبرد إلى درجة حرارة الغرفة.

6. يتم تحصين البكتيريا المعقمه بشكل معقم ، ويفضل في حجرة تدفق الصفحي ، في المرق مع مساعدة من حلقة التطعيم المعقمة على لهب bunsen. يتم تعقيم الحلقة بعد كل عملية تلقيح.

7. تحضن أنابيب المرق المحضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة في الحاضنة.

8. 0.5 مل لكل من كاشف النترات الحل A (المحتوي على حمض sulphanilic) وكاشف النترات يضاف الحل B (المحتوي على naphthylamine) إلى كل أنبوب اختبار ، يلاحظ اهتزازه وتغير اللون بعد 15 دقيقة.

الملاحظات:

1. اللون الأحمر المنتجة: النترات تخفيض إيجابي.

2. اللون الأحمر لم ينتج: يتم إضافة الغبار الزنك.

(ا) اللون الأحمر المنتجة: الحد من النترات السلبية.

(ب) اللون الأحمر لم ينتج: تخفيض النيترات إيجابي.