اختبار الأحمر الميثيل لمعرفة قدرة البكتيريا على استخدام الجلوكوز (مع الشكل)

اقرأ هذه المقالة لمعرفة المزيد عن اختبار الأحمر (اختبار MRH) ، لمعرفة قدرة البكتيريا على استخدام الجلوكوز مع إنتاج حمض ثابت كمنتج نهائي!

المبدأ:

بعض البكتيريا لديها القدرة على الاستفادة من الجلوكوز وتحويله إلى حمض ثابت مثل حمض اللاكتيك ، حمض الخليك أو حمض الفورميك كمنتج نهائي.

تقوم هذه البكتيريا في البداية باستقلاب الغلوكوز إلى حمض البيروفيك ، الذي يتم استقلابه أكثر من خلال مسار الحمض المختلط لإنتاج الحمض المستقر.

يختلف نوع الحمض المنتج من الأنواع إلى الأنواع ويعتمد على المسارات الأنزيمية المحددة الموجودة في البكتيريا. يقلل الحمض الناتج من الرقم الهيدروجيني إلى 4.5 أو أقل ، والذي يشار إليه بتغير لون الميثيل الأحمر من الأصفر إلى الأحمر.

في اختبار الميثيل الأحمر (اختبار MR) ، تزرع بكتيريا الاختبار في وسط مرق يحتوي على الجلوكوز. إذا كانت البكتيريا لديها القدرة على استخدام الجلوكوز مع إنتاج حمض ثابت ، يتغير لون أحمر الميثيل من الأصفر إلى الأحمر ، عند إضافته إلى ثقافة المرق.

المواد المطلوبة:

أنابيب الاختبار ، القارورة المخروطية ، المقابس القطنية ، حلقة التلقيح ، الأوتوكلاف ، الموقد ، حجرة التدفق الصفحي ، الجرة ، الحاضنة ، حساء MR- VP (مرق أحمر Voges Proskauer broth أو مرق الفوسفات الجلوكوز) ، محلول الميثيل الأحمر ، المستعمرات المعزولة أو ثقافات نقية من البكتيريا.

إجراء:

1. يوزن ويذوب في مكونات 100 مل من الماء المقطر في قارورة مخروطية سعة 250 مل عن طريق الاهتزاز والمكونات لمركب MR-VP broth medium (المحتوية على الجلوكوز كالمكون الرئيسي) أو مسحوقه الجاهز المطلوب لـ 100 مل من المرق. دوامات. يسمى MR- VP مرق أيضا مرق الفوسفات الجلوكوز (الشكل 7.4).

2. يتم تحديد درجة الحموضة باستخدام ورقة الرقم الهيدروجيني أو الرقم الهيدروجيني وتعديلها إلى 6.9 باستخدام 0.1N HCI إذا كان أكثر أو استخدام 0.1N هيدروكسيد الصوديوم إذا كان أقل. يتم تسخين القارورة ، إذا لزم الأمر ، لإذابة المكونات تمامًا.

3. يتم توزيع المرق في خمسة أنابيب اختبار (حوالي 10 مل لكل منها) ، موصولة بالقطن ، مغطاة بورق حرفة ومربوطة بخيوط أو شريط مطاطي.

4. يتم تعقيم أنابيب المرق عند 121 درجة مئوية (ضغط 15 رطل / بوصة مربعة) لمدة 15 دقيقة في الأوتوكلاف.

5. يسمح لأنابيب المرق أن تبرد إلى درجة حرارة الغرفة.

6. يتم تحصين البكتيريا المعقمه بشكل معقم ، ويفضل في حجرة تدفق الصفحي ، في المرق مع مساعدة من حلقة التطعيم المعقمة على لهب bunsen. يتم تعقيم الحلقة بعد كل عملية تلقيح.

7. تحضن أنابيب المرق المحضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة في الحاضنة.

8. يتم إسقاط المحلول الكحولي من الأحمر (3-4 قطرات) في كل أنبوب اختبار.

الملاحظات:

1. اللون الأحمر المنتج: MR إيجابي (أي أن البكتيريا قد حولت الجلوكوز إلى حمض مستقر ، كما هو مشار إليه بتحويل الميثيل الأحمر من اللون الأصفر إلى اللون الأحمر .وهو يشير إلى تخمر الحمض المختلط).

2. اللون الأحمر لم ينتج: MR سالبة (أي أن الجلوكوز في الوسط لم يتم تحويله إلى حمض مستقر ، وهذا يشير إلى تخمر البوتيل).