اختبار التحلل الدهني على البكتيريا لاكتشاف قدرتها على تحلل الدهون (مع الشكل)

قراءة هذه المادة لمعرفة المزيد عن اختبار تحلل الدهون ، لمعرفة قدرة البكتيريا على تحلل الدهون (الدهون)!

المبدأ:

بعض البكتيريا لديها القدرة على تحلل الدهون (الدهون) إلى الجلسرين والأحماض الدهنية ، لأنها تمتلك أنزيم "lipase".

تسمى هذه البكتيريا بكتيريا ليبوليتيك. في حين أن الدهون تشكل مستحلبًا ، عند الاستغناء عن الأجار ، فإن إنتاج التعتيم ، ومنتجاتها النهائية المتحللة بالماء ، والغليسيرول والأحماض الدهنية ، لا تشكل مستحلبًا مثل الأجار ، والتي لا ينتج عنها مثل هذه العتامة ؛ بدلا تنتج الشفافية.

في اختبار تحلل الدهون ، تزرع البكتيريا اختبار على لوحات أجار تحتوي على tributyrin كما الركيزة الدهون. Tributyrin يشكل مستحلب ، عند الاستغناء عن في أجار ، وإنتاج وسيلة مبهمة.

إذا كانت للبكتيريا القدرة على تحلل الدهون ، تحلل مستعمراتها التريبرين في الوسط في المناطق المحيطة بها إلى الجليسيرول القابل للذوبان والأحماض الدهنية (حامض البوتريك) ، في حين أن بقية مناطق الصفائح تحتوي على تربيرين غير متحلل.

ونتيجة لذلك ، تتشكل مناطق شفافة واضحة حول المستعمرات ، حيث لا تشكل المنتجات المحلمهة ، والغليسيرول والأحماض الدهنية المتكونة حولها مستحلبًا مع الأجار. من ناحية أخرى ، تبقى بقية مناطق الصفائح غير شفافة ، حيث أن التريبرين في هذه المناطق غير المستزرعة يشكل مستحلبًا مع الأجار.

المواد المطلوبة:

أطباق بيتري ، قارورة مخروطية ، مقابس القطن ، حلقة التلقيح ، الأوتوكلاف ، الموقد ، غرفة التدفق الصفحي ، التخلص من الجرة ، الحاضنة ، آجر التريبرين ، المستعمرات المعزولة أو الثقافات البكتيرية النقية.

إجراء:

1. يتم تنظيف اثنين من أطباق بتري ، مغطاة بورق حرفة وربطها مع الخيط أو الشريط المطاطي (الشكل 7.22). يتم حذف هذه الخطوة وكذلك تعقيم أطباق بتري في الخطوة 6 ، إذا تم استخدام أطباق بتري تعقيمها الفرن مباشرة.

2 - يوزن ويذوب في مكونات 100 مل من الماء المقطر في قارورة مخروطية سعة 250 مل بالاهتزاز و / أو المقطورات من وسط أجار التريبرين (باستثناء التريبرين ، وهو المكون الدهني) أو مسحوقه الجاهز المطلوب لـ 100 مل من الوسط. دوامات.

3. يتم تحديد درجة الحموضة باستخدام ورقة الرقم الهيدروجيني أو الرقم الهيدروجيني وتعديلها إلى 7.2 باستخدام 0.1N HCI إذا كان أكثر أو استخدام 0.1N هيدروكسيد الصوديوم إذا كان أقل.

4. يتم تسخين القارورة لإذابة الأجار في الوسط بشكل كامل.

5. بعد التبريد إلى حوالي 90 درجة مئوية ، يتم إضافة tributyrin واستحلب في خلاط Warring.

6. القارورة موصولة بالقطن ومغطاة بورق حرفة ومربوطة بخيوط أو شريط مطاطي.

7. يتم تعقيم اثنين من أطباق بتري والقارورة المخروطية التي تحتوي على وسط أجار tributyrin في 121 درجة مئوية (ضغط 15 رطل / بوصة مربعة) لمدة 15 دقيقة في الأوتوكلاف.

8. بعد التعقيم ، يتم إزالتها من الأوتوكلاف ويسمح لها بالبرودة لبعض الوقت ، دون السماح للوسط بالتصلب. التبريد للوسط يمنع التكثيف وتراكم قطرات الماء داخل الصفائح. إذا كان الوسيط قد تم تحضيره وتوطيده بالفعل أثناء التخزين ، فيجب تسليته عن طريق التسخين بعناية حتى يذوب تماما.

9 - لتحضير أطباق أجار التريبرين ، قبل تبريد وسط أجار التريبرين المعقم وتصلبها ، في الحالة المنصهرة الدافئة ، يتم سكبها بشكل معقم ، ويفضل داخل غرفة التدفق الصفحي ، في طبقتي بتري المعقمتين (حوالي 20 مل لكل منهما) ، الوسط المنصهر يغطي الجزء السفلي من أطباق بتري تماما.

ثم تغطى الألواح بأغطيةها ويسمح لها بالبرودة ، حتى تصلب الوسط فيها. Tributyrin يشكل مستحلب ، عند الاستغناء عن في أجار ، وإنتاج وسيلة مبهمة. يتم تبخر بخار الماء الذي قد يتكثف على السطح الداخلي للأطباق والأغطية عن طريق الحفاظ على الصفائح والأغطية في وضع مقلوب في الحاضنة عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة تقريبًا.

10. يتم وضع علامة على كل لوحة على الجانب السفلي في أربعة أرباع.

11. "التلقيح الفوري" لبكتريا الاختبار يتم بشكل معقم ، ويفضل داخل غرفة التدفق الصفحي ، في وسط كل ربع عن طريق عمل بقعة (أو لطخة صغيرة) للبكتيريا بمساعدة حلقة معقمة على اللهب. يتم تعقيم الحلقة بعد كل عملية تلقيح.

12. يتم تحضين الألواح الملقحة في وضع مقلوب من الأعلى إلى الأسفل عند 37 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة في الحاضنة حتى تظهر مستعمرات البكتيريا.

الملاحظات:

1. مناطق شفافة واضحة تشكلت حول مستعمرات البكتيريا: التحلل الدهني إيجابي.

2. مناطق شفافة واضحة لا تتشكل حول مستعمرات البكتيريا: تحلل الدهون سالب.