الاستخدامات السريرية لقياس التدفق الخلوي
الاستخدامات السريرية لتدفق عداد الكريات!
1. عد الخلايا المختلفة (مثل الخلايا التائية والخلايا البائية).
2. كشف مستضدات الخلايا البائية وتصنيف الأورام الخبيثة للدم (اللوكيميا والأورام اللمفاوية).
3. الكشف عن المستضدات على سطح الخلايا النخاعية ، وهو أمر مفيد في تشخيص متلازمة خلل التنسّج النقوي وسرطان الدم النخاعي.
4. يتم التعبير عن جزيئات CD34 على سطح الخلايا الجذعية المكونة للدم. يتم عد الخلايا الجذعية المعزولة من نخاع العظم أو الدم المحيطي باستخدام mAbs المسمى بـ CD34 ، بحيث يمكن حساب العدد الدقيق للخلايا الجذعية ونقلها إلى المريض. يتم تخزين الخلايا الجذعية المتبقية في النيتروجين السائل ويمكن نقلها في وقت لاحق إلى نفس المريض ، إذا لزم الأمر.
5. HLA phenotyping يتم استخدام Fluor chrome الموسومة mAbs لكل مستضدات HLA للربط مع مستضدات MHC من الفئة I و II على سطح الخلايا. يتم تحليل الخلايا الملونة فيما بعد (حيث تمر الخلايا كعمود واحد) في مقياس التدفق الخلوي.
6. الكشف عن المستضدات داخل الخلايا
يتم علاج الخلايا أولاً باستخدام عوامل تجعل الخلية قابلة للنفاذ دون كسر الخلية تمامًا.
↓
بعد ذلك ، يتم التعامل مع الخلايا بمواد حافظة خفيفة لربط البروتينات السيتوبلازمية في مكانها ومنعها من التسرب خارج الخلية.
↓
ثم يتم التعامل مع الخلايا مع mAbs المسمى الموجهة ضد مولدات المضادات داخل الخلايا. تدخل الـ mAbs المسمى الخلايا وتلتصق بالمستضدات داخل الخلايا.
↓
يتم تمرير الخلايا من خلال مقياس التدفق الخلوي لتقييم الخلايا الملطخة.
أنا. الكشف عن ترانسفيراز deoxynucleotide داخل الخلايا (TdT) يساعد على تحديد الأورام الخبيثة B في وقت مبكر. TdT هو إنزيم يعبر عنه أثناء إعادة ترتيب الجينات المناعية المسؤولة عن إضافة النيوكليوتيدات العشوائية عند تقاطعات أجزاء الجلوبيولين المناعي. وبالتالي ، يشير تعبير TdT في مجموعة خلايا B خبيثة إلى نمط بياني خلية غير ناضجة.
ثانيا. الكشف عن الميلوبيروكسيديز داخل الخلايا يساعد في تصنيف أنواع فرعية مختلفة من سرطان الدم النخاعي.
7. تحليل محتوى الحمض النووي للخلايا. يمكن أن يقيس مقياس التدفق الخلوي كمية المادة الوراثية في الخلية ويحدد جزء الطور S أو مقدار اختلال الصيغة الصبغية في مجموعة من الخلايا ، أ. DNA ploidy تسمى الخلايا الطبيعية التي تحتوي على نسختين من الكروموسومات خلايا ثنائية الصبغيات.
جميع الخلايا (باستثناء البويضة والحيوانات المنوية) التي لا تعتبر مضاعفا تعتبر اختلالا في الصيغة الصبغية ويمكن أن تستخدم كمؤشر موثوق من الأورام. عدد كبير من الخلايا في الورم يحتوي على كمية شاذة من الحمض النووي. يتم إجراء تحليل الحمض النووي تدفق cytometric من قبل حضانة الخلايا permeabilized مع الأصباغ الفلورية (مثل يوديد propidium).
الصبغة تقحم في الحمض النووي والفلوريس. كمية مضان يتناسب طرديا مع محتوى الحمض النووي للخلية. يمكن تقييم فعالية العلاج الكيميائي للأورام الخبيثة في المريض من خلال تحليل ploidy. يحدد تحليل Ploidy الكمية الإجمالية للحمض النووي النووي في خلايا الورم الفردية. مؤشر الحمض النووي هو نسبة مضان الحمض النووي للخلايا السرطانية إلى مضان الحمض النووي للخلية الطبيعية. مؤشر الحمض النووي للخلية ثنائية الصبغيات الطبيعية هو 1. مؤشر الحمض النووي أكثر أو أقل من 1 يشير إلى ورم في حالة عدم اختلال الصيغة الصبغية.
ب. تحليل دورة خلية DNA:
يمكن قياس محتوى الدنا من الخلايا في مراحل دورة الخلية المختلفة أثناء التكرار (أي ، مرحلة تخليق الحمض النووي قبل الطور Gq / Gj ؛ تخليق طور الحمض النووي S- مرحلة G2 / M مرحلة تخليق الحمض النووي مرحلة ما بعد الدنا) من أجل تقييم نمو الخلايا و عدوانية السرطان. يتم توليف المزيد من الحمض النووي عن طريق الخلايا السرطانية العدوانية. تظهر الخلايا التي تمر بمرحلة S توليف الحمض النووي الذي يتناسب طرديا مع عدوانيتها.
8. يمكن إجراء العديد من فحوصات خلايا الدم البيضاء مع عداد التدفق الخلوي.
أنا. إنتاج O 2 - (superoxide) كمقايسة للمرض الحبيبي المزمن.
9. الكشف عن بقاء الخلية:
ويدخل يوديد بروبيديوم الصبغ في خلايا لها أغشية مكسورة وبنية نووية معطلة. لذلك ، مع اليوديد propidium ، سوف تتوهج الخلايا الميتة بينما الخلايا الحية لا تتألق. وعلاوة على ذلك ، فإن مضان يوديد propidium في الجزء الأحمر البعيد من الطيف. لذلك ، يمكن الجمع بين هذه الطريقة مع تلطيخ mAb المنتظم ، حيث يتم تلوين الخلايا الميتة باللون الأحمر وبالتالي يمكن حذفها من تحليل البيانات.
10. طرق تدفق cytometric للكشف عن الخلايا التي تمر الخلايا المبرمج هي أيضا متوفرة.
