7 تقنيات لمراقبة الأجسام تحت الميكروسكوبات الإلكترونية
بعض من أهم التقنيات التي يتم اعتمادها لمراقبة الأجسام تحت المجاهر الإلكترونية هي: (1) صب الظل (2) تلطيخ سلبي (3) تقسيم رقيقة جدا (4) تجميد الحفر (5) توطين مكونات الخلية (6) توطين الانزيمات (7) Autoradiography.
(1) Shadow-casting:
في صب الظل ، يتم تجفيف الكائن المجهر في شبكة خاصة توضع داخل وعاء مفرغ.
يتم ترسيب طبقة رقيقة للغاية من المعدن (مثل البلاتين) على الجسم من خيوط شديدة التسخين عند زاوية مائلة ، بحيث ينتج الجسم ظلاً على الجانب غير المطلي.
يوفر فحص الصورة المظللة معلومات عن شكل الكائن (الخصائص الطبوغرافية لسطح الكائن) ، والتي يمكن ملاحظتها عن طريق مسح المجهر الإلكتروني.
(2) تلطيخ سلبي:
يتم اتباع هذه التقنية لمراقبة التفاصيل الدقيقة للأجسام الصغيرة جدًا ، مثل الفيروسات والبكتريا flagella. يُسمح للمواد المعتمِدة بالإلكترون مثل حمض الفوسفوتونجستيك أو الملح بتكوين طبقة من الرواسب الكثيفة على سطح الجسم ، دون الدخول في ذلك. عندما لا تتمكن الإلكترونات من مسدس الإلكترون من المجهر الإلكتروني من المرور عبر هذه الأسطح المطلية تصبح هذه الهياكل مرئية بوضوح.
(3) تقسيم رقيقة جدا:
تكون الخلية الميكروبية السليمة سميكة للغاية بحيث لا تسمح بتصور هياكلها الداخلية الدقيقة تحت المجهر الإلكتروني. لملاحظة البنية الدقيقة داخل الخلايا ، تكون الخلية مدمجة في كتلة من المادة البلاستيكية وتقطع إلى أقسام رقيقة جداً (رقيق مثل 60 نانومتر).
يتم تفسير التركيب الدقيق بملاحظة عدة شرائح رقيقة جدًا مقسمة على مستويات مختلفة وعند زوايا مختلفة. يمكن تحسين البنى على النقيض من خلال استخدام البقع الخاصة ، مثل اليورانيوم وأملاح اللنثانوم.
(4) التجميد والتنقيب:
للحصول على أقسام غاية في الرقة من جسم ما ، يجب أن يتم إصلاحها عن طريق المعالجات الكيميائية. هذه العلاجات الكيميائية نتيجة في القطع الأثرية. يتم التغلب على هذه القطع الأثرية عن طريق تجميد الحفر. في تجميد الحفر ، يتم تجميد العينة داخل كتلة ومقسمة ، في حين لا يزال داخلها في حالة مجمدة.
(5) توطين العناصر المكونة للخلية:
إنها تقنية خاصة يتم إجراؤها لتحديد المكونات الكيميائية للخلايا. على سبيل المثال ، لتحديد موقع مستضد في خلية ، يتم التعامل مع مقطع رقيق للغاية من الخلية مع جسم مضاد يسمى بالفريتين ، والذي يرتبط بالمستضد لتشكيل معقد مستضد مضاد للفريتين.
بما أن الفيريتين عبارة عن مادة تحتوي على الحديد عالية الكثافة ، فإن مركب الأضداد-مستضد يؤثر بشكل ملحوظ على مرور حزمة الإلكترون ، وبالتالي ينتج تباينًا عاليًا للملاحظة الواضحة تحت المجهر الإلكتروني.
(6) توطين الانزيمات:
يتم استخدام هذه التقنية لتحديد موقع الأنزيمات داخل الخلايا. على سبيل المثال ، في الكشف عن انزيم نازعة الهيدروجين isocitrate ، يتم إعداد أقسام رقيقة جدا من خلايا البكتيريا. ثم يتم لصق الذهب الغرواني بشكل خاص على الإنزيم ، بعد اتباع تقنية كيميائية مناعية. يمكن ملاحظة أنزيم الذهب الغرواني الثابت تحت المجهر الإلكتروني.
(7) autoradiography:
إنها تقنية كيميائية خلوية ، يتم فيها تحديد موقع مكون كيميائي معين في جسم ما من خلال مراقبة الموقع ، حيث يتم وضع المادة المشعة. يتعرض الجسم لأول مرة إلى المادة المشعة للسماح بامتصاصه.
ثم ، يتم تغطيتها بطبقة من مستحلب الصور الفوتوغرافية ويتم الاحتفاظ بها في الظلام لبضع ساعات. الإشعاع المؤين المنبعث أثناء تسوس المادة ينتج صورا كامنة في المستحلب. بعد المعالجة الفوتوغرافية ، يتم مشاهدة الصور المتطورة تحت المجهر الإلكتروني كحبات من الفضة في التحضير.
